badanie ogólne moczu i posiew

Użyteczność ekspresji INK4a / ARF w przewidywaniu, a może i określaniu przyszłego potencjału regeneracyjnego tkanki. tj. wskazania (c) i (d) powyżej. jest tematem aktywnych, ciągłych badań. Ta praca jednak służy jako. Dowód zasady. do stosowania ekspresji Ink4a / Arf dla wskazań (a) i (b): wykazujemy, że ekspresja Ink4a / Arf koreluje ze starzeniem się tkanki i zmianami w postępie choroby w nerce gryzoni i jądrze, i że zmniejszona ekspresja locus koreluje z reakcja na terapię przeciwstarzeniową, ograniczenie kalorii. Dlatego nasze dane sugerują, że pomiar ekspresji INK4a / ARF może podobnie przynieść kliniczną korzyść przy określaniu wieku fizjologicznego człowieka. Metody Zwierzęta. Wszystkie zwierzęta były trzymane i traktowane zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez instytucjonalny komitet ds. Opieki i użytkowania w badaniach nad zwierzętami na Uniwersytecie Północnej Karoliny. Wszystkie analizy mysie przeprowadzono na myszach C57BL / 6, o ile nie wspomniano inaczej. Do eksperymentów sortowania komórek przeanalizowano 22 do 25-miesięczne myszy o mieszanym pochodzeniu genetycznym (C57BL / 6 x NIH Black Swiss, z Yue Xiong, University of North Carolina). Stare (21 miesięcy) i młode (5 miesięcy) myszy GHR KO i WT (CR i AL) o mieszanym pochodzeniu genetycznym (pochodzące z Ola-BALB / c, C57BL / 6 i C3H, dzięki uprzejmości Johna Kopchicka, Ohio University, Ateny , Ohio, USA) zostały przeanalizowane. CR dla tej mysiej kohorty przeprowadzono jak opisano wcześniej (38). Wiekowe gryzonie otrzymano ze starzejących się kolonii gryzoni w National Institute on Aging (patrz 33, patrz również http://www.nia.nih.gov/research/rodent.htm) i uśmiercano w naszym zakładzie, a narządy były zebrane jak opisano poniżej. W przypadku badań na myszach analizowano stare myszy (25. 26 miesięcy) i młode (2,5. 3,5 miesięcy) C57BL / 6 (3 myszy i 3 kobiety). Do eksperymentów CR uzyskano stare (28 miesięcy) i młode (3 miesiące) szczury F344 AL (2 stare i 2 młode mężczyźni, 2 stare i 2 młode kobiety), a także stare (28 miesięcy) osobniki z CR (2 samce i 2 2 kobiety). Zwierzęta uśmiercono przez inhalację CO2 i pobrano narządy. Narządy zostały rażąco rozcięte bez zanieczyszczającej tkanki (np. Z tkanki tłuszczowej), a następnie szybko zamrożone. RNA zbierano z dopasowanej części narządu (np. Górnej połowy nerki) we wszystkich przypadkach, aby zapewnić, że wyniki nie różnią się z powodu składu narządów. W celu analizy RNA, tkanki pobierano po perfuzji serca za pomocą RNAlater (Ambion Inc.) lub po zatrzaśnięciu w ciekłym azocie. W przypadku barwienia IHC i H & E narządy pobierano i utrwalano, jak opisano poniżej, a następnie przechowywano w 70% etanolu aż do osadzenia parafiny. Ilościowa reakcja PCR w czasie rzeczywistym. Całkowity RNA ekstrahowano z tkanek, seryjnie pasażowanych mysich zarodkowych fibroblastów (każdy pasaż odpowiada 3 dniom in vitro) lub sortowano próbki komórek przy użyciu zestawu do izolacji RNA QIAGEN RNeasy zgodnie z instrukcjami producenta. Transkrypcję do cDNA przeprowadzono w objętości 20 ul przy użyciu oligo-dT (12. 18) lub losowego heksameru i odwrotnej transkryptazy ImProm-II (Promega Corp.) zgodnie z instrukcjami producenta. Wszystkie reakcje PCR przeprowadzono w końcowej objętości 20 ul i przeprowadzono w dwóch powtórzeniach dla każdej próbki cDNA w systemie ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (Applied Biosystems) zgodnie z protokołem producenta. Wszystkie eksperymenty przeprowadzono na narządach od co najmniej 2 różnych zwierząt w każdej grupie (stare vs. młode, CR vs. AL). Startery i sonda specyficzne dla sekwencji zostały zaprojektowane przy użyciu Primer Express (Applied Biosystems) dla wskazanych genów (Tabela dodatkowa 1). Startery i sondy oligonukleotydowe zostały zsyntetyzowane przez MWG Biotech. Wszystkie zestawy starterów zaprojektowano tak, aby obejmowały intron. Wstępnie opracowane testy zakupiono w Applied Biosystems dla dodatkowo wymienionych genów myszy i szczurów (Tabela dodatkowa 1)
[hasła pokrewne: misy tybetańskie, malwa czarna, olx ostrowiec sw ]