dermatolog tuchola prywatnie

Specyficzność oddziaływań DNA-białko (otwarta strzałka) jest wskazana przez osłabienie wiązania w obecności 100-krotnego nadmiaru nieznakowanej konsensusowej sekwencji p53 (ścieżki 4, 5 i 6) lub przez wytworzenie supershift (ścieżka 8, czarne strzałki) lub spadek złożonej intensywności (linia 7) po traktowaniu przeciwciałem p53 (2 ug FL-393). (c) EMSA pokazujący, że wiązanie się ekstraktów jądrowych nerek z oligodowotami p53 ATaA, Na, K-ATPase-A i AQP-2 p53 jest wyższe u noworodków (N) niż u szczura dorosłego (A). (d) Barwienie błękitem Coomassie białek jądrowych w próbkach nerki noworodka i dorosłego. mAQP-2, mysz AQP-2; rAQP-2, szczur AQP-2. Wyniki wykazały również, że wiązanie białek jądrowych nerki z motywami p53 w B2R (Figura 6b), AT1A, Na, K-ATPase-A i AQP-2 (Figura 6c) jest znacznie wyższe u nowonarodzonego szczura niż w dorosłego szczura. Wiązanie konkuruje o nadmiar nieznakowanego konsensusu p53 oligoduplex (Figura 6b i dane nie pokazane). Co więcej, dodanie przeciwciała p53 do mieszaniny inkubacyjnej powodowało supershift lub zmniejszenie intensywności kompleksu DNA-białka, wskazując na obecność p53 w kompleksie białko-DNA (wypełnione strzałki, Figura 6b). Integralność białek jądrowych oceniano przez barwienie błękitem Coomassie żeli SDS-PAGE (Figura 6d). Pogorszający się spadek aktywności wiązania p53-DNA prawdopodobnie odzwierciedla odpowiedni spadek poziomów p53, ponieważ dorosła nerka ekspresjonuje jedynie minimalne ilości immunostainowalnego cytoplazmatycznego p53 (dane nie przedstawione). Szczenięta p53-null mają nienormalne nerki. Silna ekspresja p53 w DZ i zdolność p53 do regulowania ekspresji RFG skłoniły nas do zbadania struktury nerek i morfologii u myszy pozbawionych p53 (14). Te myszy krzyżowano wstecznie na genetyczne tło C57BL6 / J przez dziesięć pokoleń. W porównaniu z ich rodzeństwem z miotu dzikiego (figura 7a), noworodek p53. /. myszy (n = 47) wykazywały liczne nieprawidłowości nerkowe, w tym ogniska rozrostu nabłonka rurkowego i wydłużenie barwienia PCNA w DZ (Figura 7b). Nerki szczurzych p53-null również wykazywały zmiany torbielowate (Fig. 7, cid, i Figura 8c). Nabłonek cysty jest hiperplastyczny (PCNA-dodatni) (Figura 7d). Ogólna integralność NZ w p53. /. wydaje się, że myszy są nietknięte, co wskazuje, że niedobór p53 nie ma dostrzegalnych efektów na wczesnych etapach nefrogenezy. Figura 7 myszy z niedoborem p53 ma nieprawidłowe nerki. (a) Sekcja tkanki nerek noworodka myszy typu dzikiego. Zwróć uwagę na wyraźne rozgraniczenie między NZ i DZ. Immunobarwienie PCNA ogranicza się do NZ. DZ zawiera względnie cienkościenne kanaliki składające się z pojedynczej warstwy zróżnicowanych komórek nabłonka (x 200). (b) Sekcja tkanki nerek z miotu p53. /. mysz. Zwróć uwagę na utratę rozgraniczenia między NZ i DZ; PCNA ulega ekspresji w miejscach ektopowych w kanalikach DZ. Zwróć także uwagę na nieprawidłową morfologię, powiększenie i rozrost (strzałki) nabłonka kanalików nerkowych (x 200). (c) Nerka noworodka p53. /. mysz pokazująca gigantyczną cystę otoczoną mniejszymi cystami i rozszerzonymi kanalikami (× 40). (d) Widok ściany torbieli o wyższej mocy, pokazujący proliferacyjny nabłonek PCNA-pozytywny (strzałki) (× 400). Figura 8Anormalna przestrzenna ekspresja produktów RFG u myszy pozbawionych p53. Immunolokalizacja Na, K-ATPazy-a (a i b), AQP-2 (cid) i B2R (e i f). (a) Sekcja nerkowa od noworodka myszy p53 + / + wykazująca barwienie podstawno-boczne dla Na, K-ATPazy-A (x 100). (b) Barwienie dla Na, K-ATPase-P w p53 (3 /. miot z nietypową lokalizacją na wierzchołkowym odcinku nabłonka torbieli (czarne strzałki). Oczekuje się, że ta nieprawidłowość funkcjonalna wpompuje Na + do jamy torbieli, powiększając tym samym jej rozmiar. Rozszerzone kanały gromadzenia kory mózgowej w tkance wokół torbieli (× 200) oznaczone są gwiazdkami
[przypisy: mielopatia, miód rzepakowy właściwości, mielopatia szyjna ]