podkolanówki przeciwżylakowe warszawa

Fragment DNA dalej oczyszczono stosując kolumny Elutip-d (Schleicher & Schuell) i mikroiniekcję do zapłodnionych komórek jajowych myszy C57BL / 6. Twórcy Tg zostali zidentyfikowani za pomocą PCR (5. -CATCGAGCTGAGAGGGCATCG-3 ., przedni primer, 5. -CTATAATCACTGGGATCTTGGTG-3 ., primer odwrotny). Wytworzono jedenaście myszy założycielskich, z których każda była zdrowa i płodna. Linie Tg utrzymywano, krzyżując się z C57BL / 6. Nie obserwowano znaczących zaburzeń rozwoju serca, wielkości serca lub funkcji u myszy Tg w porównaniu z kontrolą WT. Mysie myszy ukierunkowane na Beclin i Beclin Tgs. CDNA mysinazy z karboksyterminalnym znacznikiem epitopowym HA sklonowano w konstrukcie promotora (3-MHC (miejsca SalI i Hindlll). Fragment zawierający promotor a-MHC, beclin znakowany HA i ludzki poliA hormonu wzrostu został uwolniony przez BamHI i oczyszczony do mikroiniekcji. Wytworzono trzy myszy założycielskie, z których każda była zdrowa i płodna. Linie Tg utrzymywano przez skrzyżowanie z C57BL / 6, a potomstwo z 2 linii (17, 18) wykorzystano do dalszych badań. Nie obserwowano znaczących zaburzeń rozwoju serca, wielkości serca lub funkcji u myszy Tg w porównaniu z kontrolami WT. Beclin + /. myszy opracowano jako krzyżówki 129Sv / Jx C57BL / 6 i krzyżowano wstecznie z myszami C57BL / 6 przez 20 lub więcej pokoleń w badaniach eksperymentalnych (12). Beclin +/- 129Sv / J.C57BL / 6 lub a-MHC2-beclin C57BL / 6 skrzyżowany z a-MHC2 LC3 C57BL / 6 Tgs zastosowano do analizy autofagii in vivo, i użyto P-CH3C3 LC3 Tgs. jako kontrola. Skrzyknięty P-MHC-beclin C57BL / 6 lub beclin + /. Krzywe 129Sv / J.C57BL / 6 zastosowano do badań nad przeciążeniem mięśnia sercowego z przeciążeniem ciśnieniowym, a zwierzęta z miotu WT zastosowano jako kontrole. Wszystkie eksperymenty przeprowadzono z 6- do 8-tygodniowymi samcami myszy i zatwierdzono je przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania w Uniwersytecie Texas Southwestern Medical Center w Dallas. PATKA. Myszy (samce w wieku od 6 do 8 tygodni) poddano przeciążeniu ciśnieniowemu przez TAB (47) lub sTAB (17). TAB indukuje stabilny, wyrównany przerost komór z zachowaną funkcją komorową (18), a sTAB indukuje przeciążenie serca przeciążeniem ciśnieniowym (17). Po 3 tygodniach, gdy odpowiedź hipertroficzna osiągnęła stan ustalony, integralność pasma aorty została potwierdzona przez kontrolę zwężenia chirurgicznego i wizualizację znacznych różnic w kaliber prawej i lewej tętnicy szyjnej. U niektórych zwierząt ciśnienie transstenotyczne mierzono zgodnie z opisem (18). Zwierzęta pozorowane poddano identycznej operacji bez narzucania zwężenia aorty. Rejestrowanie ciśnienia krwi w mankiecie ogona. Skurczowe ciśnienie krwi rejestrowano u myszy przy użyciu nieinwazyjnego systemu mankietu do pomiaru ciśnienia krwi (ADInstruments). Przed badaniem wszystkie myszy zostały przeszkolone, aby przyzwyczaić się do obsługi i krótkotrwałego umiaru. Wyjściowe ciśnienie krwi rejestrowano przez co najmniej 4 kolejne dni w temperaturze 32 ° C (Pad izotermiczny Deltaphase, Braintree Scientific Inc.) i co najmniej 10 odczytów na mysz w każdej sesji. Nie byliśmy w stanie rejestrować skurczowych ciśnień krwi niezawodnie u myszy obciążonych przeciążeniem ciśnieniowym (sTAB), ze względu na zwiększoną śmiertelność okołokoncepcyjną i tłumione przebiegi u tych ciężko chorych myszy z dysfunkcją skurczową. Western blotting. Białka frakcjonowano za pomocą SDS-PAGE i przenoszono na błonę nitrocelulozową. Blot był blokowany (1 godzina, temperatura pokojowa [RT]) roztworem soli buforowanym Tris (TBS) zawierającym 0,1% Tween-20 i 5% mlekiem beztłuszczowym, a następnie sondowany pierwszorzędowym przeciwciałem. Błot przemyto (4 x 10 min) TBS zawierającym 0,1% Tween-20, a następnie inkubowano ze sprzężonym z HRP drugorzędowym przeciwciałem (1: 5000, godzina, RT). Błony przemywano (4 x 10 min) TBS zawierającym 0,1% Tween-20 i ujawniano
[patrz też: olx solec kujawski, olx ostrowiec sw, napięciowe bóle głowy ]