sanatorium uzdrowiskowe modrzew w inowrocławiu

W hepatocytach otwarcie pory przejścia przez mitochondrialne wyzwala autofagiczne wychwytywanie poszczególnych mitochondriów (44). W tym kontekście rozprzężenie oksydacyjnej fosforylacji powoduje, że mitochondria nie są w stanie wytworzyć ATP i przekształcają je w bezcelowe pochłaniacze aktywności ATPazy. Takie mitochondria muszą zostać usunięte, aby zapobiec katastrofalnej utracie ATP. Może to być jedna z najważniejszych funkcji autofagii w sercu. Jednak punkt, w którym aktywność autofagiczna staje się śmiercią autofagiczną, nie została zdefiniowana. Jedną z możliwości jest śmierć, gdy zbyt mało mitochondriów pozostaje po tym, jak uszkodzone zostały skierowane i oczyszczone. Po trzecie, autofagia może stanowić źródło energii, aby zrekompensować zwiększone wymagania ATP wywołane przeciążeniem ciśnieniowym. Przez wiele lat wywnioskowano, że upadające serce jest relatywnie pozbawione energii z powodu niedopasowania podaży i popytu ATP. Intrygująco, aktywowana AMP kinaza białkowa, czujnik ATP, który jest zwiększony w przeroście mięśnia sercowego (45), jest związany z autofagią (46). Uzasadnione jest zatem postawienie hipotezy, że autofagia kardiomiocytów przetwarza białka cytoplazmatyczne w celu zwiększenia dostaw energii i uzupełnia substrat do syntezy ATP. Perspektywiczny. Istnieje rosnące zapotrzebowanie na nowe leki zapobiegające lub odwracające patologiczny przerost serca i niewydolność serca. Wysiłki zmierzające do selektywnej autofagii w sercu mogą być racjonalnym krokiem w kierunku opracowania nowych strategii zapobiegania niewydolności serca u ludzi. Co więcej, istnieją już leki stosowane klinicznie, które wykazały, że mają wpływ na proces autofagii. Wreszcie, ponieważ aktywność autofagiczna wiąże się z szeregiem mięśni szkieletowych i zaburzeniami neurologicznymi, stwierdzone tutaj ustalenia mogą mieć znaczenie dla tych chorób. Metody Przygotowanie przeciwciała LC3. Przeciwciało anty-peptydowe LC3 wytworzono przez chemiczne sprzęganie mysich LC3 (aminokwasy 2. 15 plus C-terminalna cysteina, PSEKTFKQRRSFEQC) z hemocyjaniną skałoczepa. Nowonarodzone białe króliki immunizowano podskórnie, a surowice oczyszczono metodą powinowactwa. Wykryto prążki o 18 kDa i 16 kDa, których względna obfitość przesunęła się dramatycznie z krótkoterminowym niedoborem (ustalonym wyzwalaczem autofagii), zgodnym odpowiednio z LC3-I i LC3-II (dodatkowe figury i 2). Konstrukcje ekspresyjne. cDNA mLC3 zamplifikowano metodą PCR z biblioteki cDNA (5a-GGCCGGAGATCTATGCCGTCCGAGAAGACCTTCAAG-3 (3, starter do przodu, 5. -GGCCGGGAATTCCTTTGTTGGAGTCTTACACAG-3 ., starter odwrotny) i subklonowano na koniec C wzmocnionego plazmidu GFP (EGFP-C1) (BD Biosciences Miejsca Clontech, Bglll i EcoRI). Myc-LC3 zaprojektowano przez wstawienie mLC3 zamplifikowanego przez PCR do plazmidu pcDNA3-N-myc. cDNA rLC3 amplifikowano z mózgu szczurów za pomocą RT-PCR (5. -CGCGCCATGCCGTCCGAGAAGAC-3 ., primer przedni, 5. -GTCTGTCACAAGCATGGCTCTCT-3 ., primer odwrotny) i wstawiono do wektora klonującego TA pCR2.1 (Invitrogen). W przypadku EGFP-rLC3 otwartą ramkę odczytu rLC3 z wektora TA-LC3 wprowadzono do plazmidu EGFP-C1. Hodowla komórek i transfekcja. Mioblasty szkieletowe C2C12 utrzymywano w DMEM uzupełnionym 20% FCS. Jeden dzień przed transfekcją komórki wysiano na szalkę o średnicy 35 mm (1,5 x 105 na studzienkę). Plazmidy transfekowano stosując Lipofectamine 2000 (Invitrogen) zgodnie z protokołem producenta. Dwadzieścia cztery godziny po transfekcji komórki poddano głodzie aminokwasów (2 godziny), a następnie zebrano. Reporter autofagii Cardiomyocyte Tgs. Fragment o 1,2 kb zawierający gen fuzyjny EGFP-mLC3 wklonowano w konstrukt promotora (3-MHC (miejsca SalI i Hindlll). Fragment Notl niosący promotor a-MHC (5,5 kb), gen fuzyjny EGFP-LC3 i sygnał poliA ludzkiego hormonu wzrostu (0,6 kb) wycięto i oczyszczono metodą GELase zgodnie z protokołem producenta (EPICENTER Biotechnologies)
[przypisy: mielopatia szyjna, ciosmy, młodzieńcze idiopatyczne zapalenie stawów ]