włosy łonowe wypadają

Komórki wstępnie inkubowano z DMEM wolnym od cysteiny i metioniny (Sigma-Aldrich) uzupełnionym 10% (obj./obj.) FCS i mieszaniną penicyliny-streptomycyny przez godzinę w 37 ° C. Komórki znakowano przez 20 minut za pomocą 400 ul S35 trans-label (ICN Biomedicals) w końcowej objętości 2 ml. Po płukaniach komórki przepuszczano przez czas wskazany na fig. 6, B i C w 50 ml kompletnego MEM. Pod koniec okresów pościgu komórki poddano lizie w 500 ul PBS zawierającego 1% Nonidet P-40 i mieszaninę inhibitorów proteazy (Roche Applied Science) na lodzie przez 30 minut. Jądra i nierozpuszczalne resztki usunięto przez odwirowanie. Pozostały ekstrakt inkubowano z 2 .g mAb anty-CD1d lub mAb anty-MHC klasy I (klon W6 / 32, Caltag Laboratories) przez godzinę w temperaturze 4 ° C. Mieszaninę uzupełniono BSA do końcowego stężenia 1% i inkubowano przez noc z 40 .l kulek białka A / G (Santa Cruz Biotechnology Inc.) w temperaturze 4 ° C. Kulki białka A / G płukano 4 razy lodowato zimnym PBS, a związane białka analizowano przez elektroforezę w SDS-PAGE (żel gradientowy 4% 20% Tris-HCl, Bio-Rad Laboratories). Żele suszono i analizowano za pomocą Storm 860 PhosphorImager (Molecular Dynamics). Chlorochinę (Sigma-Aldrich) dodano bezpośrednio do pożywki pościgowej na początku okresu łańcucha, z 100-krotnego roztworu w PBS (końcowe stężenie, 10 um). Materiały uzupełniające Zobacz Dodatkowe dane PodziękowaniaTa praca została poparta przez Instytut Medyczny Howarda Hughesa oraz przez grant przygotowujący doktorantów National Institute of General Medical Sciences (1R25GM56847, do DJ Sanchez). Chcielibyśmy podziękować L. Coscoy i J. Baronowi, a także innym członkom laboratorium D. Ganem za nieocenione porady, oraz L. Lanierowi i M. Lodoenowi za ich pomocny wgląd i porady dotyczące konfiguracji systemu współfinansowania i IFN -. testy uwalniania. Ponadto dziękujemy J. Betchel, B. Glaunsinger, YT Liu i Y. Liang za hodowlę komórek BCBL-1. D. Ganem jest badaczem Instytutu Medycznego Howarda Hughesa. Przypisy Patrz odnośny komentarz od strony 1146. Zastosowano niestandardowe skróty: EGFP, ulepszone GFP; Y-GalCer, P-galaktozyloceramid; komórki iNKT, komórki T NK wyrażające niezmiennie rearanżowany TCR-y łańcuch; KSHV, mięsak Kaposiego związany z wirusem opryszczki; MIR, modulator rozpoznawania immunologicznego; MVB, ciało wielopęcherzykowe. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów.
[hasła pokrewne: młodzieńcze idiopatyczne zapalenie stawów, nerwica serca objawy, olx solec kujawski ]